我要投搞

标签云

收藏小站

爱尚经典语录、名言、句子、散文、日志、唯美图片

当前位置:白小姐开奖结果 > 刺鱼目 >

广东海洋人学硕学位论文斜带石斑鱼干扰素调节因子 的克隆鉴定及

归档日期:08-14       文本归类:刺鱼目      文章编辑:爱尚语录

  广东海洋人学硕学位论文斜带石斑鱼干扰素调节因子 的克隆鉴定及特征分析摘要 家族在鱼类非特异性免疫中发挥重要作用 一直受到人们广泛关注。本研究首次分别对斜带石斑鱼 家族的一个基因 进行克隆 并选择其中的 个重要基因 干扰素影响因子 进行了克隆鉴定、诱导表达和初步功能分析以从分子机制上对斜带石斑鱼的防病

  广东海洋人学硕学位论文斜带石斑鱼干扰素调节因子 的克隆鉴定及特征分析摘要 家族在鱼类非特异性免疫中发挥重要作用 一直受到人们广泛关注。本研究首次分别对斜带石斑鱼 家族的一个基因 进行克隆 并选择其中的 个重要基因 干扰素影响因子 进行了克隆鉴定、诱导表达和初步功能分析以从分子机制上对斜带石斑鱼的防病和分子疫苗的研制打下基础。干扰素影响因子 是干扰素家族的第一个成员 在免疫应答、抗病毒、细胞生长调节以及细胞凋亡等生物过程中发挥着重要的作用。本文对斜带石斑鱼的 基因进行了克隆 测序及各种特征化研究的研究。以 做对照利用 刺激斜带石斑鱼 然后采肝脏、头。肾、脾脏、肌肉、脑、心脏提取总 。根据相近物种 的保守序列设计引物 得到了保守片段 通过 获得了斜带石斑鱼基因的 全长 同样的方法获得了 基因 全长。 基因 全长为 完整 编码个氨基酸 ’非编码区 ’非编码区 。基因’非翻译区包含一个外显子和一个内含子 ’非翻译区包含一个外显子。 基因 推测的氨基酸序列与其他物种进行比对斜带石斑鱼与海鳜同源性为 乌鳢大菱鲆 。利用 序列 构建原核重组表达质粒。重组质粒经 、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌 诱导重组蛋白成功表达 表达的蛋白约 。诱导温度在 重组蛋白主要以包涵体形式存在但当诱导温度降到 重组蛋白中可溶性蛋白量明显增加。实时定量分析表明 基因在健康鱼体的各个组织中都有表达 的体外诱导能够影响 基因在组织中的表达量。亚细胞定位表明 蛋白在培养的鱼细胞核中检测到 但并没有类似于其他鱼 蛋白的动态变化的过程。关键词 斜带石斑鱼 家族 基因分子克隆 原核表达 诱导表达实时定量 检测 亚细胞定位斜带石斑鱼十扰素冈子的克隆罄定及特征分析 广东海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体 均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名 彳年多月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版 允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于 、保密口 在年解密后适用本授权书。 、不保密团。 请在以上相应方框内打“ 罗年占月日广东海洋大学硕士学位论文前言 研究目的和意义斜带石斑鱼 俗称老虎斑 属于箱科 石斑鱼属 英文名为 。目前 斜带石斑鱼是我国南方沿海地区重要的养殖品种之一 因其肉质细嫩鲜美 一直为消费者所喜爱。近年石斑鱼养殖的密度越来越大 因而产生了多种病害【 给石斑鱼的养殖生产造成了很大的损失。对石斑鱼病害的防治除了保持水域环境优良、控制养殖密度以及药物治疗外 还需要从鱼体自身免疫的方向进行研究工作。特别是一些与病毒相关的病害 更需要卓有成效的免疫以及疫苗防治 因此有必要进行与免疫相关的一些基础研究。 国内外研究现状干扰素调节因子 是一类转录调节因子 主要调节 刺激基因的表达。 家族已发现 个成员 分别是 如图。这个家族的所有成员都有一共同的特征 个氨基酸组成的高度保守的结构域 其中含有五个色氨酸 的重复区 类似于 转录因子的 结构。 结构域可以形成螺旋 转角螺旋结构 识别同源的 序列 家族的末端都有一个 结构域 负责与其它转录因子间的同源或异源的相互作用【 的研究表明基因的启动子区含有至少四个顺式调节元件 分别为 途径相关的转录因子的异源二聚体 的结合位点。 家族通过 结构域与基因的 增强子元件相结合来调节 基因的转录。对 的晶体结构分析表明其序列中的 螺旋转角 螺旋结构的识别序列【 家族的统一识别序列【。其中 序列对于的识别是必不可少的 因此 不能与含有 核心序列、但不含 ’从序列的 增强子结合。在 家族中 有四种 基因转录的正向调节因子包括 家族转录因子的结构 家族中最早被发现能够激活基因表达 并且在许多细胞中都有组成型表达的基因 结构域和端的转录激活区 氨基酸序列是的核定位信号 。通过 结构域与 启动子区的 增强子元件结合 可以调节 基因的转录。 还可以通过蛋白激酶 的作用使多个位点磷酸化 从而进行翻译后修饰 这些磷酸化位点分布于 的两个区域 一簇位于 结构域内 氨基酸残基另一簇在转录激活区的 氨基酸残基内。 野生型和点突变型的共转染实验表明了 端转录激活区内网个磷酸受体残基对于其转录激活潜能的重要性。核定位信号通常是一段含有多个赖氨酸 或精氨酸 组合的氨基酸序列 哺乳类 的核定位信号紧靠结构域 。广东海洋大学硕士学位论文在信号通路中的作用 基因的诱导表达受多种因素影响 如病毒感染、 诱导、一些细胞因子的刺激 包括白介素 、肿瘤坏死因子 、血小板衍生生长因子 。当哺乳类细胞受到病毒的入侵时 基因的表达来调节病毒在细胞内的复制达到抗病毒作用。近来的研究显示 对于细胞质内的 诱导途径无太大作用 但在 信号诱导 基因表达的途径中有 可以直接与作用 并且 是以 依赖型的方式被活化的。时 信号通路中的作用受细胞类型和配基特异性的影响有些需要 的存在而有些则不需要。在一些巨噬细胞和骨髓源树突状细胞中 和免疫调节因子 的有效诱导就是通过 依赖型的 活化方式来调节的。然而也有实验表明 病毒可以诱导正常水平的表达【…。 的其它功能除了对 的调节作用 基因还与细胞生长、细胞凋亡等功能相关。 在肿瘤形成中的作用已被广泛了解是肿瘤抑制基因 具有抑癌活性 则有致癌活性两者的表达失衡会导致肿瘤形成 等证明过量表达的细胞表现出恶性增生及转化细胞的生长特征 将这样的细胞注射入裸鼠后会导致裸鼠有肿瘤形成 但再向有恶性特征的细胞转染并过量表达 恶性增生特征即可消失。等也证实白血病患者的 所在染色体有缺失现象 的失活使细胞癌基因易被活化而导致癌变。近来的研究显示 诱导细胞凋亡是为阻止异型细胞的无限增殖可以通过依赖于 或不依赖于 的方式来调节细胞的生长和凋亡。 其它 相关 是病毒诱导的 基因表达的关键调节因子之一 具有广泛的组成型表达。 结构域外端包含核输出信号 区和末端的反应结构域。通常情况下以无活性的单体形式存在于细胞质中 这与其分子内部存在 相关 存在于紧接 结构域的 发生突变则眦一可转移至细胞核 同时 也有 等证实 两个氨基酸就是 但其作用相对较弱斜带由斑鱼干扰素肉了‘的免隆餐定及特自 分析通常只表现 的胞质定位作用【 。在病毒感染时 能够磷酸化形成二聚体 并转位到细胞核内调节基因转录【 在其末端序列中有潜在的病毒介导的磷酸化位点 这些位点的磷酸化是 活化以调节基因转录的重要条件 未活化的 即使转移至核内也不能调节基因的转录。人类 的磷酸化位点主要是 。其中的磷酸化是 活化的关键决定因素【 晶体结构的研究表明活化和二聚体的形成有两种模式 磷酸化诱导的二聚体形成模式和自身抑制性模式。 位点磷酸化的丝氨酸残基与其它 结构域的疏水区相互作用导致同源或异源二聚体的形成这种形成模式称为磷酸化诱导的模式。而自身抑制性模式中 在通常的非活化状态下由其 【螺旋与中间的区相互作用形成紧密的疏水性结构 位点的多个丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化后可以打开疏水性结构 从而活化 并形成二聚体。 等转录因子结合形成复合物结合蛰基因、细胞因子及其它 基因的特定 序列 诱导 基因的表达参与抗病毒反应【 病毒是的主要诱导剂 仙台病毒、麻疹病毒、新城疫病毒 、水痘 带状疱疹病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒和呼吸道合胞病毒均能诱导 末端位点的磷酸化。研究发现 核衣壳蛋白能通过诱导病毒活化激酶而活化 而且 蛋白能与 直接作用 提示 本身就可通过对衣壳蛋白的识别检测到病毒病原体的存在。包括 也能诱导 磷酸化。过量表达具有 结合活性的病毒蛋白能抑制 的磷酸化和转录活化功能 这些 结合蛋白抑制作用可能与其封闭病毒复制时产生 的作用有关。另有研究表明 某些细菌的脂多糖也能激活 最早被发现结合于病毒编码基因 启动子区的类 结构域 并抑制启动子活性。后来发现 基因可以编码多个不同的剪切变异体 形成多种结构【 的结构与家族的其它成员类似 均含有 不同的是的组成型表达水平很低 结合至受体上时 组成的异源三聚体转录复合物被活化 激活下游基因 诱导 基因的磷酸化。与 相同的是 未活化的 定位于细胞质中 在细胞受病毒感染时 末端有类似于的磷酸化位点 进行点突变而不能磷酸化就无法激活基因的表达。而缺失 序列中可诱导磷酸化的 广东海洋人掌硕七学位论文基酸片段后突变体在病毒感染的情况下也不能转移至细胞核内 这也表明磷酸化是转移至细胞核的重要条件。 是抗病毒信号通路中两个最关键的调节因子都能够活化 基因的表达 激活的能力更强 。近来的研究显示的半衰期较短 只有约 小时 这是由于其对泛素依赖型降解过程较敏感。 的这种易变特性与整个基因诱导过程的瞬时性是一致的 主要是为了防止 的过量表达会对机体造成伤害【 信号通路的作用根据感染病毒的不同可以通过不同的识别受体诱导 基因的表达 启动细胞内的抗病毒反应 这些受体主要包括两种 的跨膜识别受体和由 介导的信号途径中起着重要作用。最初研究表示 能够启动 的起始表达 诱导表达的并在后来的 诱导过程中起作用。然而 现在证实 病毒诱导 基因表达的早期和后期阶段均需要 的参与 。虽然 基因的诱导表达是连续性的过程 并且 诱导的正反馈调节也出现在后期阶段 对于基因表达的早期和后期阶段均起到关键作用 只是在 缺失时发挥一定作用。 是另一个病毒诱导信号途径中的重要转录调节因子对于多种细胞因子和趋化因子的表达起到重要作用【 也存在多种剪切变异体利用编码 个氨基酸的 剪切变异体在细胞中过量表达发现 能够特异性的被 激活而不能被仙台病毒活化 并且 能诱导基因的表达增强 引。在感染的 细胞中 的过量表达也能诱导多种细胞因子和趋化因子的表达【 一样在未受刺激的细胞中定位于细胞质 而在病毒感染后聚集到细胞核内。 包含两个 和一个 元件 在未诱导细胞中 的作用更强从而导致 的胞质定位【 既可以诱导基因的表达也可以抑制其表达 这取决于 之间的相互作用 相互作用时能激活基因的转录而抑制时 介导的 基因的表达。作为 作用的直接目标基因 也能抑制体内外肿瘤细胞的生长 通过 期细胞周期停滞作用 并诱导多种细胞周期调节因子和促凋亡基因 等的表达以抑制肿瘤细胞的增殖【 了的克隆鉴定及特征分析鱼类 鱼类 的研究最早见于对牙鲆 的报道【 这是鱼类获得的第一个 家族成员。随后 、虹鳟、斑马鱼 、大菱鲆 、海鲷 、鲫鱼 序列比对和进化分析表明克隆到的鱼类均是哺乳类的同源基因。 牙鲆 利用人工感染病毒的牙鲆自细胞 提取 建立牙鲆 文库 从中筛选到全长 的牙鲆 编码 的蛋白。作为鱼类获得的第一个 牙鲆 与鸟类、哺乳类 的序列相似性更高结构域相似性达 。牙鲆 结构域包含家族成员特征性的保守色氨酸 残基。牙鲆 广泛表达于肝、脾、肾、肠、肌肉、卵巢、心和脑等各种组织。感染 病毒的牙鲆 表达水平显著提高感染后 天分别检测的表达量呈现先升高后降低的趋势 感染 天时检测的表达量最耐 『基因是继牙鲆之后获得的第二个鱼类 也是第一个确定为 的基因。根据获得的河鲍基因组全长序列 从转录起始位点至 信号的基因全长 包含 个外显子和 个内含子。基因 序列长 个外显子和个内含子组成 编码 。氨基酸序列同牙鲆 相似性达 与鸟类、哺乳类 基因也具有广泛性的组织表达大多组织检测到的是 基因转录本而腮中可检测到更大的转录本 这往往是由于选择性剪切形成的【 虹鳟侬基因 全长 包含 序列编码 的蛋白 基因全长 编码 的蛋白 广泛表达于头肾、腮、脾脏等组织但肝脏中没有 诱导后所有组织均有表达。注射抵抗 病毒的 疫苗后一周 在虹鳟体内 的表达显著上调。体外 虹鳟性腺细胞中

  斜带石斑鱼干扰素调节因子1IRF1的克隆鉴定及特征分析特点,分析,帮助,克隆,IRF1,特征分析,斜带石斑鱼,irf1,石斑鱼,干扰素

本文链接:http://dadesky.net/ciyumu/1219.html